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《食品中β-烟酰胺单核苷酸含量测定 高效液相色谱法》

  上海千实精密机电科技有限公司行业资讯:根据《中国认证认可协会团体标准管理办法》规定,经中国认证认可协会批准立项,中国标准化研究院等单位已完成《食品中β-烟酰胺单核苷酸(NMN)含量测定 高效液相色谱法》(项目编号:2022TB028)团体标准的起草工作,形成征求意见稿,现公开征求意见。

  β-烟酰胺单核苷酸(β-nicotinamide mononucleotide,NMN)是一种具有生物活性的核苷酸,由磷酸基和含核苷的核糖与烟酰胺反应自然形成。在动物细胞中 , NMN 是 一 种 细 胞 能 量 来 源 , 是 烟 酰 胺 腺 嘌 呤 二 核 苷 酸 (nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)生物合成的代谢物,在细胞增殖和功能中起着至关重要的作用。研究表明补充 NMN 可以提高体内 NAD+含量,从而延缓、改善、防止衰老诱导的代谢紊乱、老年疾病等,所以 NMN 近年来成为生理医学领域的研究热点,并成为医药、功能性食品、化妆品等行业的珍贵原料。由于 NMN 在我国还未获得药品、保健食品、食品添加剂和新食品原料许可,所以主要作为跨境产品通过跨境电商平台进入国内。

  人体可自身合成少量 NMN,也会通过摄食西兰花、卷心菜等果蔬补充 NMN。但由于这些果蔬中 NMN 含量都较少,如果想通过食物来补充 NMN 非常困难。所以近年来以 NMN 为主要活性物质的膳食补充剂成为消费市场的宠儿,但是诸多乱象也如影随形,其中最严重的就是部分NMN 产品其中根本不含有 NMN 或者其中 NMN 含量远少于其标称,达到以次充好目的。目前国内可以在跨境电商平台上购买到 NMN 跨境产品,但这类产品售价普遍十分高昂,最便宜的也要 1500 元/瓶,贵的甚至有 20000 元/瓶,如果没有做好产品质量控制,将严重损害消费者权益。所以 2021 年 2 月国家市场监管总局食品经营司下发《关于排查违法经营“不老药”的函》(以下简称“排查函”),明确指出目前 NMN 在我国未获得药品、保健食品、食品添加剂和新食品原料许可,不能作为食品进行生产和经营,要求各个省级市场监管部门对相关经营者进行全面排查。但是目前国际上还没有食品中 NMN 含量测定方法标准,无法对此类产品中 NMN含量进行准确测定,就无法对相关食品进行监管。

  本标准针对目前国际上还没有食品中 NMN 含量测定方法标准,无法对此类产品中 NMN 含量进行准确测定,存在质量无法控制的问题,所以需要研制食品中 NMN 含量的检测方法标准。

  本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件规定了食品中β-烟酰胺单核苷酸(NMN)含量的高效液相色谱测定方法。本文件适用于NMN原料和含有NMN的胶囊剂、片剂产品中NMN含量的测定。

  方法原理:

  试样经50%甲醇水溶液溶解,超声提取后经离心除杂和微孔滤膜过滤,亲水色谱分离,紫外检测器检测,外标法定量。

  仪器和设备:

  1.高效液相色谱仪,配有柱温箱。2.电子天平,感量0.00001g。3.涡旋振荡器。4.超声波清洗器,功率不低于250W,或相当的设备。5.离心机,不低于10000rpm,或相当的设备。

  取样:

  称取NMN原料、去除胶囊外皮的胶囊剂、片剂NMN产品5g备用。

  NMN原料:

  取试样混匀,精密称取试样0.5g(精确到0.001g)置于50mL离心管中,以50mL试样提取溶液溶解,以10000 rpm的速度离心5min,取250μL上清液置于10 mL容量瓶中,以试样提取溶液定容至10mL,经0.45µm有机滤膜过滤,待进样分析,备用。

  胶囊剂、片剂:

  取试样适量,混匀,研细,精密称取试样0.5g(精确到0.001g)置于50mL离心管中,以50mL试样提取溶液溶解,超声20 min使试样充分溶解,以10000 rpm的速度离心5min,取250μL上清液置于10mL容量瓶中,以试样提取溶液定容至10 mL,经0.45µm有机滤膜过滤,待进样分析,备用。

  高效液相色谱参考条件:

  高效液相色谱参考条件如下:a) 色谱柱:Supersil HILIC 亲水色谱柱,250 mm×4.6 mm,粒径 5 μm,孔径 100Å,或性能相当者;b) 流动相:流动相 A(4.5):流动相 B(4.6)=15:85(V/V)等度洗脱;c) 进样体积:10 μL;d) 柱温:35 ℃;e) 流速:1.0 mL/min;f) 检测波长:235 nm

  试样溶液的测定:

  将试样溶液按仪器参考条件进行测定,以保留时间定性,得到试样溶液中NMN组分的峰面积。根据标准曲线得到待测液中NMN的浓度,平行测定次数不少于两次。待测样液中NMN的响应值应在标准曲线线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进行分析。NMN原料、NMN片剂产品、NMN胶囊剂产品色谱图见附录A。

  分析过程中,每20次试样测定后应加入1个与试样峰面积相近的标准工作液,如果测得的值与原值相对平均偏差超过5.0%,则应重新进行标准曲线的制作。

  重复性:

  在重复条件下获得的2次独立测试结果的绝对差须不大于2个测定值的算术平均值的10%。