标准集团解析高效液相色谱柱的正确使用

上海泛标纺织品检测技术有限公司是标准集团（香港）有限公司内地分公司，主要负责内地销售业务，上海千实精密机电科技有限公司成立于2012年，是生产工厂，负责研发生产测试设备，专注于研发、设计及生产纺织测试仪器，为学术研究单位及检测机构提供纺织测试仪器和服务，上海千实是目前国内较有竞争力和研发实力的纺织检测仪器厂家之一，研发团队由一群经验丰富的工程师组成，我们本着全心全意为客户服务，努力推动纺织检测仪器技术革新而努力。

　　色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。关于色谱柱的安装、维护、保存以及由色谱柱导致的这样那样的色谱故障也是一门学问。高效液相色谱柱的正确使用包含：加装保护柱，过滤流动相和样品，净化样品，避免过高的柱压，注意温度和酸碱度，正确及时的冲洗等。

　　1.加装保护柱
　　保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾”同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器,但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污染,因此,加装保护柱是必要的,特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱必不可少的措施。
　　保护柱填料应与分析柱一致,粒径可较分析柱大。保护柱属消耗品,经过一定次数的样品分析(5～1次)后,出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时,应考虑更换保护柱。
　　2.过滤流动相和样品
　　流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成,原则上,所有经过色谱柱的流动相均应过滤,但在实际操作上应视具体情况而有所区别:当有机溶剂用色谱纯级,水用石英亚沸水或其它超纯水时,在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时,过滤并无更多实际意义。
　　当流动相中含有缓冲盐时,则过滤是必要的,如前所述,当缓冲溶液放置一段时间(视环境温度不同而异,夏季一般不超过48h,冬季一般不超过一周)后,在使用前还应重新过滤。
　　所配制的样品试液在注入流路系统前均要经.45μm(.22μm则更好)孔径滤膜过滤。要注意区分水系和油系,二者不可混用,以防止滤膜溶解而造成污染。
　　装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器要定期清洗和更换,以避免滤器因过载而起不到过滤作用。
　　3.净化样品
　　当样品中含有对色谱柱有损害的化学成分,如产生性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质,以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。
　　4.避免过高柱压
　　虽然高效液相色谱柱能耐受的压力可达6psi(磅/平方英寸),但过高及过大的压力变化均会缩短色谱柱的寿命,避免的方法是
　　(1)柱压过高时,尽可能采用较小的流速,以不超过柱允许压力的一半为宜。
　　(2)当流速较大时,应采取流速梯度的办法使流速分步到位。
　　(3)使用手动进样阀时,进样阀的切换要尽可能的快。否则超过2%的压力冲击会很快使柱报废。当使用多柱联用时,柱切换要避免在高压下进行。
　　5.注意温度和酸碱度
　　一般以硅胶为基质的色谱柱使用温度不超过6℃,以低于4℃为宜,特别是在流动相pH接近使用限度时,更应降低使用温度。
　　温度过高会加快键合相的水解和硅胶的溶解,从而使填料性质改变,柱床塌陷,降低柱效,改变峰形。
　　目前的键合硅胶色谱柱标示的pH适用范围可达2～1,但在实际使用时应避免极端的pH条件,特别是在偏碱性的条件(pH≥8)下使用,如必须要在极端的pH条件下使用时,可通过以下方法避免柱损害:
　　(1)在泵和进样阀之间加装预柱(饱和柱)来饱和流动相
　　(2)降低使用温度
　　(3)检验完毕后立即用与所使用的流动相互相混溶的“温和溶剂”彻底清洗。
　　6.正确及时的冲洗
　　开始试验前,应了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱,如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶,如不能混溶,要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。

标准集团（香港）有限公司作为一家集研发、制造、销售、培训、服务于一体的现代技术企业，致力于将更多检测仪器输送市场，提供纺织类、皮革类、燃烧类、汽车内外饰件、材料环境气候老化等等材料物理性能检测仪器，更可接受非标定制，购买前均可按照客户的要求进行针对性试验，确保所购仪器适用。